感受态细胞的制备方法与步骤

感受态细胞的制备方法与步骤

最近小编收到很多问题，其中一个就是下面小编为大家整理一下关于感受态细胞的制备方法与步骤的步骤，希望这些方法能够帮助到大家。

首先，细菌小量培养，从LB平板上挑取新活化的E.coli DH5a单菌落，接种于3~5ml LB液体培养基中，37"C 180r/min振荡培养过夜。

然后，进行扩大培养，取细菌悬液1ml,以1: 100的比例接种于100ml LB液体培养基中,37C振荡培养1~2h至Asoo=0.5左右。

然后，收集菌体，将培养液转人离心管中，冰上放置10min,然后4"C 5000r/min离心10min,弃上清加人1/ 10 体积(10ml)0~4C预冷的无菌CaCl2(0.01mol/L)溶液轻轻悬浮细胞，冰上。

然后，CaCl2处理菌体，放置10min 后,4"C 5000r/min 离心10min,弃上清液，加人2000pl 预冷的无菌CaC12(O.0lmol/L)重新悬浮细胞，分装成100pl 备用。

然后，感受态细胞的收集与分装，加入1600pl 预冷的无菌CaCl2(O.01mol/L)和400pl 无菌的70%甘油轻轻悬浮细胞。

最后，进行长期保存，直接加保存液2ml,冰上放置几分钟后，分装成100pl小份，液氨速冻10min后，在-70C下保存备用。