蛋白质鉴定方法及流程

蛋白质鉴定方法及流程

蛋白质鉴定方法

提取待鉴定生物的总蛋白，用蛋白裂解液溶解所述总蛋白，得到蛋白溶液。

将所述蛋白溶液中的蛋白依次进行还原、烷基化，得到还原烷基化产物；3)用蛋白酶酶解所述还原烷基化产物中的蛋白质。

得到酶解产物用iTRAQ试剂标记所述酶解产物中的蛋白质，得到标记产物对所述标记产物进行液相色谱分离。

收集洗脱出的液体，将单位时间内洗脱出的液体作为一个液体组，得到多个液体组；对所述多个液体组分别进行质谱鉴定。

用液相色谱串联质谱对步骤5)得到的所有不同的大组样品进行蛋白质鉴定，得到待鉴定生物的蛋白质组数据。

将吸收峰无遮盖的液体组进行合并，得到不同的大组样品，使同一大组样品达到a)和/或b)的目的：a)同一大组样品的不同吸收峰能够相互区分，b)同一大组样品的吸收峰的相对强度不会过高或过低，确保相对强度低的吸收峰不会被误认为噪音而被舍弃。