蛋白纯化的方法

蛋白纯化的方法

蛋白纯化技术有哪些？蛋白纯化技术基本的原理是什么？今天在这里以Abbkine的预装柱、亲和层析填料为例做一个简单的介绍：

根据蛋白的特性，一般可以有以下5种纯化方法。

目前平台配备的主要是前四种层析纯化的各种凝胶柱。反相层析技术在一般的蛋白纯化中较少使用，下面将详细介绍常用的前四种层析技术原理及特点。

1.凝胶过滤层析

根据大小和形状分离，这种分离方式是非吸附性的，整个分离过程中只需要一种缓冲液，实验操作方便。

在峰谱图中，出峰顺序是：大分子先流出层析柱，小分子后出。

2.离子交换层析

不同蛋白质的等电点（pI，isoelectric point）特性，使在不同pH缓冲液条件下所带正/负净电荷不同，选择不同的离子交换柱实现分离。

离子交换层析属于吸附性分离方式，纯化过程中它具有可逆、操控性强及实现样品浓缩等特点。在精纯实验中是常与其它方法相结合使用的主要技术。

3.亲和层析

通过生物分子之间的特异性相互作用来实现分离的层析方法。

亲和层析具有高选择性、高纯度、快速、浓缩等特点，在重组蛋白的分离中多作为第一步的粗纯，实现对绝大部分杂质蛋白的去除。

4.疏水相互作用层析

依据生物分子间疏水性差别实现分离的一种层析方式。

高离子强度下，增进蛋白质中的疏水性氨基酸与层析介质间的疏水性相互作用，削弱其静电作用力。

洗脱时，降低流动相离子强度，削弱蛋白质分子与层析介质间的疏水作用，实现目的蛋白的纯化和收集。

疏水作用层析也属于吸附性分离方式，对具有疏水特性的目的蛋白具有高选择性和浓缩等特点。